期刊详情 INFORMATION
刊名：山西医科大学学报
主管：山西省教育厅
主办：山西医科大学
主编：郭政
周期：月刊
语种：中文
出版地：山西省太原市
开本：16开
ISSN：1007-6611
CN： 14-1216/R
邮发代号：22-11
复合影响因子：0.434
综合影响因子：0.316
被以下数据库收录
获奖情况：
中国科技类核心期刊
中国科技论文统计源期刊
美国CA源期刊
俄罗斯AJ刊源
山西省一级期刊
国外数据库收录：
CA 化学文摘(美)(2011)
期刊荣誉：
Caj-cd规范获奖期刊
原核表达载体pET28a-3×flag-LukS-PV的构建与表达鉴定
作 者：汪自然 马凡 王杨燕 马筱玲
关键词： 金黄色葡萄球菌; 基因表达; 纯化;
摘 要：目的构建原核表达载体pET28a-3×flag-LukS-PV,并在大肠杆菌中进行表达纯化及鉴定。方法通过PCR扩增得到Luk S-PV基因和3×flag基因,经琼脂糖凝胶电泳分离切胶回收后与p MD-18T载体连接。通过NdeⅠ和Bam HⅠ对p MD-18T-3×flag载体和p ET28a载体进行双酶切后,连接得到p ET28a-3×flag载体。使用Bam HⅠ和XhoⅠ分别对p ET28a-3×flag载体和p MD-18T-LukS-PV进行双酶切,连接后得到p ET28a-3×flag-LukS-PV重组质粒并测序鉴定,随后转化入大肠杆菌BL21中。利用SDS-PAGE电泳对表达产物进行分析并使用抗His单克隆抗体和抗flag多克隆抗体进行Western blot检测。结果 PCR获得了Luk S-PV和3×flag基因,构建的p ET28a-3×flag-LukS-PV重组质粒经测序鉴定无碱基突变。SDS-PAGE电泳表明重组蛋白主要以可溶性蛋白形式存在,且重组蛋白浓度和纯度均较高。Western blot表明使用抗His单克隆抗体和抗flag多克隆抗体在约40 k D均可产生特异性浓集条带。结论成功纯化得到了高浓度和高纯度的3×flag-LukS-PV重组蛋白,为后续研究Luk S-PV的生物学功能和具体机制奠定了基础。
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